二、自体干细胞移植的方法

(一)自体骨髓干细胞移植 [7~11,15~20]
先局麻下抽取患者的骨髓血,然后将抽取的骨髓血在干细胞实验室分离纯化得到BM-MNC,再通过肌注或动脉内注射的方式进行细胞的移植。在单纯骨髓干细胞移植中,骨髓血的抽取量一般在400~500m l,得到的骨髓单个核细胞总数在(1~3) ×10 9个。由于患者大多年龄比较大,体弱并多伴有糖尿病、高血压、冠状动脉硬化性心脏病和(或)脑动脉硬化症等,如果一次抽取过多的骨髓血,会增加心脑血管并发症的发生。可通过同时输血或减少采髓量的办法来克服这一缺点。
(二)自体外周血干细胞移植 [12~14]
先采用骨髓动员的方法(皮下注射粒细胞集落刺激因子5~7天)将骨髓中的干细胞动员到外周血液循环中,通过专用的单个核细胞分离机,将含有造血干细胞的单个核细胞分离出来,然后再移植到患者本人的缺血局部(通过缺血局部肌内注射或者通过动脉腔内注射),从而达到促进血管新生,缓解肢体缺血的目的。患者不会失血,而一次得到的单个核细胞总数一般可达10 10量级。缺点是长时间的骨髓动员会使大量有核细胞进入血液循环,导致血液黏稠度增加,血管内血栓形成的机会增加,增加心肌梗死/脑梗死发生的危险 [12~14]。因此,在骨髓动员早期就应采取正规的抗凝措施,在整个过程中还需要注意心脑血管并发症的发生。
(三)改良的自体骨髓干细胞移植 [21~23]
为避免在单纯骨髓干细胞移植中抽取骨髓血量过多的问题,首都医科大学宣武医院谷涌泉等 [21]发明了改良的骨髓干细胞移植方法,即骨髓动员刺激以后的骨髓干细胞移植。主要步骤是在抽取骨髓前先使用粒细胞集落刺激因子(G-CSF)短期动员骨髓2~3天,在大量增殖的干细胞仍在骨髓中未进入外周血之前,抽取骨髓血200ml,在干细胞实验室分离纯化BM-MNC后再进行移植。从临床研究的资料中发现:改良的自体骨髓干细胞移植的疗效无论是主观评价指标,还是客观评价指标均比单纯的骨髓干细胞移植和外周血干细胞移植更好,而且骨髓动员刺激以后的骨髓干细胞不良反应也较外周血干细胞少。
与前2种方式相比较,此方式的主要优点是:①抽取骨髓血量少(200ml),对患者全身影响不大;②动员时间短,外周血液中单个核细胞的含量不高,血液黏稠度比外周血干细胞低,发生心脑血管意外的几率较小;③可以获得大量的骨髓干细胞。