临床标本可在选择性培养基（T-M培养基或MTM培养基）以及适宜的环境下进行淋球菌的分离培养。淋球菌在选择性培养基上可形成圆形、细小、凸起、光滑湿润、半透明或灰白色的特征性菌落，菌落直径为0.5～1.0mm，易乳化，有黏性。

T-M培养基或MTM培养基，CO ₂培养箱或带有烛缸的普通培养箱。

取材前1小时内不应排尿，采用男性拭子插入尿道内2～3cm，以旋转方式轻轻转动并保留5～10秒后取出。

可用手指自耻骨联合后沿女性尿道走向轻轻按摩尿道，用同男性相似的方法取材。

采样时先用经生理盐水湿润的扩阴器扩阴，用无菌棉拭子清除宫颈口外面的分泌物，再将女性取材拭子插入宫颈管内1～2cm，稍用力转动，保留5～10秒后取出。

将取材拭子插入肛管2～3cm，接触侧壁10秒，从紧靠肛环边的隐窝中采集分泌物。被粪便严重污染的拭子必须丢弃，更换拭子后重新取材。

用压舌板固定舌头，用拭子越过舌根到咽后壁及扁桃体隐窝、侧壁等处，反复擦拭3～5次采集分泌物。

对青春期前女孩，将取材拭子放置于阴道后穹窿10～15秒，采集阴道分泌物。对于处女膜完整的幼女需采用男性拭子，可通过处女膜孔采集阴道标本。

翻开下眼睑，从眼角向中间轻轻用拭子擦拭下眼结膜表面采集分泌物。

注：临床标本采集后应立即送检培养。如标本需转运，床边接种于相应的转运培养基，在35～37℃、5%～10% CO ₂的条件下孵育18～24小时后于48小时内送抵实验室分离培养。

培养基在使用前需放于室温或培养箱中预温，各类拭子标本的接种可采用分区划线法，将取材的拭子转动涂布于平皿的上1/4范围，然后用接种环分区划线，使菌量逐渐减少，以保证获得单个菌落。

接种后平板应立即放置于35～37℃、5%～10% CO ₂以及湿润（70%湿度）的环境中培养，可以使用CO ₂培养箱，也可以在普通培养箱内使用CO ₂产气袋或烛缸（于底部加湿，在缸内点燃白色无味的蜡烛，盖上烛缸盖使蜡烛熄灭）。

接种后24小时观察菌落形态，如未见菌落生长，则至少观察到72小时，仍无菌生长才可作出淋球菌培养阴性的报告。如有疑似菌落需进一步鉴定后再报告结果。

（1）经过24～72小时培养后，如有疑似淋球菌菌落，需进一步通过菌落涂片革兰氏染色、氧化酶或糖发酵试验等对菌株进行鉴定后，再报告结果。

（2）培养72小时仍无淋球菌特征菌落生长可报告“无淋球菌生长”。

培养法有较高的敏感性和特异性，是诊断淋病的“金标准”。对女性、亚临床感染者以及疗效观察者的检测标本都有较高的敏感性。

（1）为了从临床标本中分离出淋球菌，推荐使用含有抑菌剂的选择性T-M培养基或MTM培养基，以抑制部分革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌的生长，提高淋球菌的阳性检出率。

（2）淋球菌对外界环境变化敏感，冰箱中拿出的培养基推荐预先放入36℃培养箱复温（或实验室室温平衡）30分钟以上再进行接种，取材后应立刻接种、培养。

（3）临床菌株生长速度差异较大，24小时开始每天观察细菌生长情况，如未见细菌生长应持续至72小时。

（4）部分临床菌株可能会因菌毛和外膜蛋白的存在，菌落形态表现为有皱纹、轮廓分明、边缘清晰，而无菌毛的菌落有弥漫生长的边缘，更有光泽。

淋球菌在生长过程中产生氧化酶，可使氧化酶试剂（盐酸四甲基对苯二胺或盐酸二甲基对苯二胺）发生颜色改变。

0.5%～1%盐酸四甲基对苯二胺（或盐酸二甲基对苯二胺），滤纸，或商品化试剂盒。

选择性培养基中分离的可疑单个菌落。

（1）挑取可疑单个菌落涂在干滤纸条上，在涂有细菌部位加1滴氧化酶试剂；或将氧化酶试剂直接滴加到平皿中的可疑菌落上，观察单个菌落的颜色变化。

（2）结果判读：新鲜的分离菌株滴加盐酸四甲基对苯二胺显紫蓝色；或滴加盐酸二甲基对苯二胺显紫红色，并保持30秒以上，即为显色反应阳性。

（1）氧化酶试验阳性标本结合革兰氏染色、菌落特征可以报告“初步鉴定疑似淋球菌生长”。

（2）氧化酶试验阴性可报告“无淋球菌生长”。

（1）氧化酶试验阴性可以排除淋球菌感染。

（2）氧化酶试验是淋球菌初步鉴定试验的重要指标之一，但对于泌尿生殖道以外部位的分离株，还应结合其他方法进行确认鉴定。

（1）氧化酶试剂在高温、见光的条件下很容易失效，所用的氧化酶试剂应新鲜配制，放在棕色瓶中4℃可保存1周。

（2）蘸取细菌涂布于滤纸上时可采用一次性接种环，用镍铬合金接种环可能造成假阳性结果。

（3）如果培养时间过长，细菌衰老可能造成假阴性结果。

（4）许多常见的细菌对氧化酶亦呈阳性，所以不能以氧化酶试验确定淋球菌感染。

（5）选择性培养基中偶尔会出现杂菌生长，应该挑取分离培养后疑似淋球菌的单个菌落做氧化酶试验。

不同细菌分解特定糖类的能力各不相同，产生的代谢产物也因细菌种类而异。糖发酵试验就是观察细菌能否分解特定种类的糖而产酸或产气。淋球菌能分解葡萄糖，但不分解蔗糖、乳糖、麦芽糖，当它分解葡萄糖时会产酸，使培养基的pH值降低，培养基中的指示剂颜色会发生改变，以此来鉴别同属的其他奈瑟菌。易与淋球菌混淆的不同细菌的糖发酵谱见表2-1。

（1）水浴箱、一次性过滤灭菌器。

（2）分析纯以上的蔗糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖，酚红指示剂，缓冲平衡盐指示溶液（balanced salt solution，BSS）。

（3）1%生长添加剂的GC基础琼脂+2%血红蛋白培养基（或者1%生长添加剂的GC基础培养基+10%新鲜脱纤维羊血）等。

经选择性培养基培养分离出的单个菌落。

取选择性培养基上疑似单个菌落，转种到含1%生长添加剂的GC基础琼脂+2%血红蛋白培养基中，纯培养16～18小时。

取纯培养菌2满环（直径3mm），混悬于0.4ml的BSS溶液中制成高浓度的菌悬液。

取5支小试管，在1～4管中分别加入0.05ml过滤除菌的20%蔗糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖，第5管不加糖（对照管）。

每管加入 0.1ml BSS。

每管加入0.05ml菌悬液，充分混匀，37℃孵育2～4小时后观察结果。

若仅葡萄糖管的颜色由红变黄，其他糖管颜色不变，为淋球菌糖发酵试验阳性。

（1）淋球菌糖发酵试验阳性标本结合初步鉴定结果可报告“确认鉴定有淋球菌生长”。

（2）淋球菌糖发酵试验阴性可报告“无淋球菌生长”。

淋球菌糖发酵试验阳性，结合初步鉴定试验结果，可以确认为淋球菌感染。

（1）试验所用糖纯度要高，应选用分析纯以上的糖。

（2）待检菌株应使用新鲜培养物，一般为经16～18小时纯培养的细菌。

组合鉴定系统也可作为淋球菌的确证方法。试剂盒将碳水化合物利用试验和直接酶测定试验进行组合，用于奈瑟菌属的快速鉴定，另外，全自动细菌鉴定仪也可用于奈瑟菌属的鉴定。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrum，MALDI-TOF MS）技术作为新兴技术已广泛应用于病原体鉴定，虽然检测设备比较昂贵，但单个反应的成本较低、检测速度快、操作简单。现阶段有研究采用此方法用于淋球菌的确证试验。MALDI-TOF MS基于微生物核糖体等高丰度稳定表达的特征蛋白指纹图谱，可对菌种进行快速鉴定。检测准备需要有MALDI-TOF MS质谱仪、质谱样本预处理试剂盒以及淋球菌培养物。检测流程可以参照各质谱仪的使用说明书，及CLSI M58（第1版）MALDI-TOF MS微生物鉴定标准进行操作。MALDI-TOF MS具有快速、准确、敏感性高等优点，能明显缩短检验的报告时限，更有利于疾病的快速诊断，但试验操作中应避免其他微生物的污染。