- 实用尿液有形成分图鉴
- 张时民主编
- 1874字
- 2021-04-16 19:19:59
二、常用检验方法
1.离心沉淀法
(1)标本收集:
当日上午排出的第一次或第二次新鲜晨尿的中段尿标本,急诊患者可随时留取新鲜中段尿标本。尿标本量应大于10ml,以20~40ml为佳。收集后标本应尽快送实验室检查,以不超过2小时为佳。
(2)操作方法:
①取刻度离心试管,倒入混匀后的新鲜尿液10ml,以相对离心力( RCF) 400g速度离心5分钟。②离心停止后,轻轻取出离心管,防止沉淀物重新浮起。③手持离心管,倾斜45°~90°弃去上清液,或用吸管吸取并弃除9. 8ml上清液,留下0. 2ml沉渣。轻摇离心管,使尿沉渣中的有形成分混合均匀。如使用带有特定沉渣乳头的尿沉渣离心管,可迅速倾倒掉上清液,管内乳头部存留的沉渣量为0. 2ml。④取尿沉渣0. 02ml,滴在载玻片上,用18mm×18mm的盖玻片覆盖尿沉渣。注意不要有气泡出现。
(3)观察和计数方法:
用10×10物镜头观察盖玻片下的有形成分,至少观察20个视野,注意发现较大的物质和管型。然后改用10×40物镜头观察鉴定细胞成分和计算数量,应观察10个高倍视野,计数镜下所见细胞数量的最低和最高值,记录结果。
(4)报告:
传统报告方式以最低XX~最高XX个细胞/HPF( high power field,高倍视野)的方式报告,但推荐采用10个视野的平均值/HPF的方式报告。管型至少观察20个低倍视野,以免遗漏,如发现管型需转换高倍镜鉴定管型类别。传统报告方式以某类管型最低数~最高数/LPF( low power field,低倍视野)的方式报告,现今推荐可采用20个视野的平均值/LPF的方式报告。
结晶或上皮细胞的表达方式可用“+”号表达。占据或覆盖1/4视野为“+”;占据或覆盖2/4视野为“++”;占据或覆盖3/4视野为“+++”;满视野为“++++”。不推荐细胞数量用此类打“+”号的方式表达。
(5)参考范围:
红细胞: 0~3/HPF;白细胞: 0~5/HPF;管型: (透明管型)每低倍视野平均值0~1个/LPF。
2.直接镜检法
将非离心标本混合均匀,直接取一滴置于玻片上,立即观察。后续步骤同于离心沉淀法。参考范围与标准的离心沉淀法不同。多用于标本量大的情况下快速筛检以及明显血尿、脓尿或混浊尿的筛查。从专业角度讲不推荐该方法作为尿沉渣检查常用方法,易导致漏检。
3. SM( Sternheimer-Malbin)染色法
属结晶紫-沙黄染色法。尿液中的一些有形成分,经染液中的两种色素染色后,使得尿中有形成分的形态、结构显示清晰,特别是对白细胞和各类管型,经SM染色液染色后,形状清楚易认,管型易于识别和鉴别,可明显提高检出率。
(1)染液配制
1) A液:
取结晶紫3. 0g,草酸铵0. 8g,溶于95%( V/V)乙醇20. 0ml中,加蒸馏水80. 0ml。
2) B液:
取沙黄O( safranin O) 0. 25g,溶于95%( V/V)乙醇10. 0ml中,加蒸馏水100. 0ml。
SM应用液的配比和保存: A液B液按397的比例混合,过滤后贮存于棕色试剂瓶内冷藏保存(室温条件下可保存3个月)。
(2)操作方法:
将尿液标本按常规方法离心并留取沉渣,取沉渣2滴,加染色液1滴,混合均匀,约3分钟后染色完成。取1滴于载物片上,加盖玻片镜检。染色时间延长会导致染色效果加深。
(3)有形成分特点
1)红细胞:
不着色或染成淡紫色。时间延长会呈现深紫色。
2)白细胞:
根据白细胞受色深浅不同可分为三类。①浓染细胞:低比密尿液中直径约10~20μm,核染深红至紫色,浆呈淡红色~紫红色,胞质内颗粒粗,无运动性,细胞大小较一致;高比密尿中,浓染细胞大小呈萎缩状,浆呈粉红色,核呈暗紫色,粗颗粒,无运动性;多为老化死亡细胞。②淡染细胞:在低比密尿中胞体膨胀,大小不等,核染淡蓝~蓝色,核界限不清晰,浆呈无色~淡蓝色,可见微细灰白色颗粒,有运动性;在高比密尿中淡染细胞体积呈显著缩小状态,浆呈淡蓝色,核呈清晰的蓝色,粗颗粒,无运动性。③闪光细胞:是一种在炎症感染过程中发生脂肪变性的分叶核白细胞,其胞质中充满了能做布朗运动的“闪光”颗粒,这种颗粒在结晶紫中不受色而闪闪发光,故称闪光细胞。闪光细胞核与胞质染色为无色~淡蓝色,浆内颗粒呈苍白色或淡蓝色,具有隐约的闪光现象。这种细胞常见于急性肾炎或慢性肾盂肾炎急性发作患者尿中,故可作为肾盂肾炎的一种辅助诊断指标。
3)上皮细胞:
核染紫色~深紫色,浆呈淡桃红色~淡紫色。
4)管型:
透明管型呈淡红色或紫色;颗粒管型呈淡紫色~紫蓝色;细胞管型染深紫色;蜡样管型染红紫色~深紫色,脂肪管型中的脂肪滴不着色。
5)脂肪滴:
不着色。
6)酵母样真菌:
不着色或淡紫色。
7)滴虫:
染淡蓝色或淡紫色,易见鞭毛。
4.仪器分析法
目前采用数字图像拍摄技术,通过计算机软件进行判断、识别和计数,可以达到对尿液中的常见有形成分进行初步分析,此类仪器近年来发展较为迅速。本书将列专门章节,以匈牙利77电子有限公司( 77 Elektronika Kft)生产的Cobio XS和国内科宝S80型尿液有形成分分析系统为例,对其组成、检测原理、检测流程和性能评价等方面进行介绍。详见第四章的详细介绍和第五章的相关图谱。