第六节　肾移植组织配型及免疫监测

人类主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex，MHC）又称为人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）基因复合体，是一组决定移植组织是否相容、紧密连锁的基因群[1-2]。HLA具有显著的多态性，与同种异体移植受者的排斥反应密切相关[3-4]。HLA不完全相容始终是一个潜在的危险因素终身存在，并且一旦条件成熟，可以在术后任何时期导致排斥反应发生[5]。

近年来的研究发现HLA匹配程度与肾移植长期效果密切相关。HLA匹配良好，可以减少免疫抑制剂的剂量，免疫抑制剂的不良反应也随之减少，并且可以降低患者致敏的程度，对二次移植患者尤为重要[6]。组织配型可评价供、受者的组织相容程度，包括以下几种方法。常见的是HLA-A、B、DR六抗原相匹配，氨基酸残基匹配及HLA Matchmaker。近年来，德国和荷兰的学者又推出了间接预测识别的HLA表位（predicted indirectly recognizable HLA epitopes，PIRCHE）评分[7]。PIRCHE评分在器官分配时，可以预测移植后T细胞相关的针对HLA多肽的免疫反应，可有效地模拟并提供可能被T细胞识别的多肽数量，最终发现最适合受者的供者[8]。

为了进一步规范组织配型及免疫监测技术操作，中华医学会器官移植学分会组织器官移植学专家从组织配型基本技术、配型方法、群体反应性抗体、供体特异性抗体、受者免疫监测等方面，制定本规范。

1　组织配型基本技术

组织配型技术主要包括HLA分型和补体依赖淋巴细胞毒性试验（complement-dependent cytotoxicity，CDC）。

1.1　HLA分型技术

近年来，常用的HLA分型技术包括聚合酶链反应-序列特异引物（polymerase chain reaction-sequence specific primers，PCR-SSP）法、聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针杂交（PCR with sequence-specific oligonucleotide probe，PCR-SSO）法、DNA 序列测定（sequencebased typing，SBT）法。最近兴起的二代测序也称下一代测序（next generation sequencing，NGS）技术日益成熟，其在分析供体特异性抗体（donor specific antibody，DSA）和筛选高致敏受者方面显示出独有的优势。

1.1.1　PCR-SSP分型方法

目前市场上有瑞典Olerup和ONE LAMBDA两种主流产品用于PCR-SSP法HLA分型，两种产品PCR-SSP分型方法所用到的主要仪器耗材、对样本的要求、操作步骤及检测原理大体相同，仅在PCR扩增条件和反应板各孔的设置有所区别，相对应的两者均有其配套的读板纸和分析软件（Olerup分析软件SCORE和ONE LAMBDA分析软件Unimatch）。现以瑞典Olerup产品为例，对PCR-SSP法HLA分型技术进行阐述。

主要仪器、耗材、试剂：①仪器包括移液器1套、PCR仪、涡旋混匀器、高速离心机、水浴锅（56℃）、电泳仪、电泳槽、紫外分析仪、加样针；②耗材包括1.5ml离心管，计时器，10μL、200μL、1ml加样枪头若干；③试剂包括DNA提取试剂盒、A-B-DR-DQ-SSP复合试剂盒、PCR反应混合液、Taq酶、琼脂糖、荧光素（EB）。

标本要求：抽取2ml枸橼酸葡萄糖（acid citrate dextrose，ACD）或乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetra acetic acid，EDTA）抗凝血。样本新鲜备检，在18~25℃的室温环境中，8h内完成检测。为维持样本的稳定性，在2~8℃保存最多不超过7d。

检验方法：①模板DNA提取，DNA浓度为20~200ng/μL，最佳浓度50ng/μL。纯度为OD₂₆₀/OD₂₈₀=1.60~1.80。②PCR扩增条件按产品说明书。③电泳采用1×TAE配制2%的琼脂糖凝胶，加入EB，待凝胶完全凝固后，使用1×TAE作为电泳缓冲液（running buffer）进行电泳检测；根据96孔板格局取每个反应孔的PCR产物加入琼脂糖凝胶的电泳孔中，电压120V，电流200mA进行电泳；待第1排的红色加样缓冲液（loading buffer）指示剂的位置跑到两排孔的中间位置时，大约需要12min即可进行凝胶成像。保存电泳图进行结果分析。④读取结果，根据电泳图上出现的阳性条带位置，利用试剂所附带的读板纸或者专用的SCORE软件进行结果判读。

1.1.2　PCR-SSO分型方法

PCR-SSO法是目前HLA分型技术中最常用的一种，其与PCR-SSP法相比具有高通量的优势，PCR-SSO法以Luminex平台为基础，适用于批量检测，而PCR-SSP法更适用于单个检测。目前市场上主要有IMMUCOR Lifecodes和ONE LAMBDA两种试剂用于PCR-SSO法HLA分型技术，二者的操作步骤及获取分析软件有所区别，下面将一一进行叙述。

1.1.2.1　IMMUCOR Lifecodes SSO法

主要仪器、耗材、试剂：①仪器包括移液器1套（能够量取2.5µL液体的8道移液器）、Luminex、PCR仪、八连管离心机、涡旋混匀器、高速离心机、水浴锅（56℃）；②耗材包括1.5ml离心管，计时器，PCR用八连管，杂交板，10μL、200μL、1ml加样枪头若干；③试剂包括DNA提取试剂盒、Lifecodes SSO试剂盒、Taq酶。

标本要求：采用2ml ACD或EDTA抗凝血。样本新鲜备检，在18~25℃的室温环境中，8h内完成检测。为维持样本的稳定性，在2~8℃保存最多不超过7d。

检验步骤：①模板DNA提取，DNA浓度为10~200ng/μL，纯度为OD₂₆₀/OD₂₈₀=1.65~2.00。②样本扩增，扩增体系的配置及扩增程序见产品说明书。③样本杂交，将HLA-A、B、DR、DQ微珠各7.5μL分别加入杂交板中，随后将相应PCR产物各2.5μL加入其中，按说明书推荐程序进行杂交。④读取结果，样本杂交时，准备1：200稀释的溶解液/结合藻红蛋白的链酶亲和素（dilute solution/R-phycoerythrin-conjugated streptavidin，DS/SAPE）混合物，在56℃下稀释样品，每孔加入80μL DS/SAPE混合液，将杂交板在PCR仪上取下，转移杂交板到Luminex获取数据，MatchIT 软件分析结果。

1.1.2.2　ONE LAMBDA SSO法

主要仪器、耗材、试剂：①仪器包括移液器1套（能够量取60µL液体的8道移液器）、Luminex、PCR仪、平板离心机、涡旋混匀器、低温高速离心机、水浴锅（56℃）、电泳仪、电泳槽；②耗材包括1.5ml离心管，封口膜，计时器，杂交板，溶液槽（确保洁净），10μL、200μL、1ml加样枪头若干；③试剂包括DNA提取试剂盒、LABType®SSO试剂盒PCR扩增引物、D-mix、Taq酶。

标本要求：所需的最小样本体积为2ml抗凝血。样本处理采用抗凝血0.5ml，裂解红细胞后，11 500g离心2min，弃上清，留细胞提取DNA。

检验步骤：①模板DNA提取，DNA浓度为20~200ng/μL，纯度为OD₂₆₀/OD₂₈₀=1.65~t1.80；②样本扩增，扩增体系的配置及扩增程序见产品说明书；③样本杂交，PCR仪60℃孵育15min；④微珠用量（每人份 1.8μL）（表 2-7）；⑤读取结果，1×SAPE 偶联（PCR 仪60℃孵育5min），洗涤后每孔加55μL的洗涤液，吹打混匀后转移到Luminex获取数据，Fusion软件分析结果。

1.1.3　SBT分型方法

主要仪器、耗材、试剂：①仪器包括移液器1套（能够量取60μL液体的8道移液器）、测序仪、PCR仪、平板离心机、涡旋混匀器、低温高速离心机、水浴锅（56）、电泳仪、电泳槽；②耗材包括1.5ml离心管，封口膜，计时器，杂交板，溶液槽（确保洁净），10μL、200μL、1ml加样枪头若干；③试剂包括DNA提取试剂盒、测序试剂盒、位点特异性扩增引物、D-mix、Taq酶、琼脂糖凝胶、DNA染料、TBE。

标本要求：同上。

检验步骤：①模板DNA提取，DNA浓度为10~40ng/μL，纯度为OD₂₆₀/OD₂₈₀=1.65~1.80；②样本PCR扩增；③PCR产物纯化（ExoSAP-ITTM）；④测序PCR；⑤测序产物纯化-乙醇沉淀；⑥测序；⑦结果分析采用AccuTypeTM分析软件分析判读结果。

1.1.4　PCR-NGS分型方法

NGS测序即高通量测序，先对HLA基因进行PCR扩增，再利用NGS技术进行高通量测序，可以高效地完成HLA基因的分型工作。利用PCR-NGS方法进行HLA分型具有速度高、批量大、精确性好等特点。

主要仪器、耗材、试剂：①仪器包括移液器1套（能够量取60µL液体的8道移液器）、Luminex、PCR仪、平板离心机、涡旋混匀器、低温高速离心机、水浴锅（56℃）、电泳仪、电泳槽；②耗材包括 1.5ml离心管，封口膜，计时器，杂交板，溶液槽（确保洁净），10μL、200μL、1ml加样枪头若干；③试剂包括DNA提取试剂盒、琼脂糖凝胶、DNA染料、TBE、PCR扩增试剂盒、酶切试剂盒、测序试剂盒等。

标本要求：同上。

检验步骤：模板DNA提取和DNA浓度测定；样本PCR扩增和扩增产物检测；PCR产物净化；测序和测序产物纯化；上机分析等。

1.2　补体依赖淋巴细胞毒性试验

CDC又称为淋巴细胞毒交叉配合试验。主要原理是采用供者外周血淋巴细胞作为抗原，与受者的血清共同孵育，如存在相应抗体，在补体的作用下，发生抗原-抗体反应，导致淋巴细胞死亡。根据淋巴细胞死亡数量百分比判断交叉配型结果。

1.2.1　微量淋巴细胞毒性试验

主要使用仪器、耗材、试剂：①仪器包括移液器1套、荧光显微镜、水平离心机、低温冰箱、计时器；②耗材包括Terasaki微量反应板，1.5ml离心管，溶液槽（确保洁净），10μL、200μL、1ml加样枪头若干；③试剂包括淋巴细胞分离液、兔补体、矿物油、阳性血清、荧光终止剂。

标本要求：供者肝素抗凝的外周血5ml；受体血清2ml。

操作方法：见产品说明书。

结果观察：荧光显微镜下判定结果。

结果判读及临床意义：见表2-8。

1.2.2　流式细胞仪法

主要使用仪器、耗材、试剂：①仪器包括流式细胞仪、漩涡振荡器、加样枪（10、200、1 000μL）、台式离心机、流式专用试管；②异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate，FITC）标记的 C1q（C1q-FITC）、多甲藻叶绿素蛋白（peridinin chlorophyll protein，PerCP）标记的 CD3（CD3-PerCP）、别藻蓝蛋白（allophycocyanin，APC）标记的CD19（CD19-APC）、生理盐水、磷酸盐缓冲液（phosphate buffer saline，PBS）、淋巴细胞分离液。

标本要求：供者EDTA抗凝外周血5ml；受者血清2ml。

操作方法：二硫苏糖醇（dithiothreitol，DTT）预处理受者血清，破坏IgM分子，保留IgG分子的活性；Ficollficoll密度梯度离心法分离淋巴细胞，以PBS调整细胞浓度为（2.0~2.5）×109/L；将供者淋巴细胞悬液与预处理后的受者血清混匀、孵育；加入C1q-FITC、CD3-PerCP、CD19-APC进行标记；PBS洗涤后，用流式细胞仪检测。

结果分析和判读：将流式细胞法-CDC实验管上流式细胞仪进行数据采集，根据前向光散射（forward light scatter，FSC）和侧向光散射（side light scatter，SSC）设定淋巴细胞门，读取104个淋巴细胞；依CD3和CD19的表达，在散点图中分别设定T淋巴细胞门和B淋巴细胞门，分析T淋巴细胞门中C1q+细胞百分比；流式细胞法-CDC结果判读见表2-9。

2　配型方法

2.1　HLA-A、B、DR六抗原相配

确定移植供者与受者HLA相匹配的标准是组织、器官移植的基础[9-10]。1987年10月美国器官资源共享网络（United Network for Organ Sharing，UNOS）制定强制性HLA六抗原相配肾脏分享政策，要求ABO血型相容和HLA-A、B、DR六个抗原相配的肾脏，在全美国范围内共享。早期的临床应用显示能够达到六抗原相配的肾移植仅占2%~5%。1990年，UNOS对六抗原配型标准稍作调整，把表型为纯合子的供、受者包括在内，使达到六抗原相配的肾移植增加到5%~8%。1995年3月，UNOS进一步对原标准进行修改，将六抗原相配标准延伸为HLA-A、B、DR六抗原无错配，即目前国际上通用的HLA六抗原无错配标准（zero HLA-A，B，DR antigen mismatch，0 Ag MM），使达到0 Ag MM标准的尸体供肾移植受者明显增加。

尽管按0 Ag MM标准选择供、受者的肾移植获得了较为理想的1、5、10、20年肾存活率，但鉴于HLA系统的高度多态性，要寻找到HLA相匹配的供、受者，就必须增加受者或供者的样本量。由于供者的样本量是随机的，HLA相配率的大小在很大程度上取决于受者样本量的大小。由于供、受者的样本池均很小，且我国各移植中心尚未通过计算机联网分配肾脏，达到0 Ag MM标准的肾移植比例更低。因此，0 Ag MM标准的临床实用性（尤其是在我国的临床应用）受到很大的限制。

2.2　氨基酸残基

鉴于HLA六抗原配型标准的临床实际应用受到诸多客观条件的限制，寻找更为实用、临床可行的配型策略成为移植免疫学者、组织配型专家和临床医师共同关注的重要课题。早在20世纪90年代初期，许多学者的临床回顾性分析发现，同样是供、受者的HLA错配，有些错配明显影响存活率，而有些错配并无明显影响甚至有益，因此，提出所谓“有益错配、中性错配和有害错配”之分的假设。

1996年3月，Terasaki领导的世界著名的美国加州大学洛杉矶分校（University of California，Los Angeles，UCLA）组织配型中心提出了新的配型策略——HLA-氨基酸残基配型（amino acid residue matching，Res M），又称交叉反应组（cross reactive groups，CREG），并于第11届国际临床组织相容性会议上一致通过，正式向UNOS申请。获得批准后成为继0 Ag MM后“第2个最佳配型标准”，对组织配型和器官移植产生了重大影响。随后，根据对Res M标准的研究和大宗临床肾移植患者回顾性随访分析结果，相继提出了几种模式的Res M标准。根据1996年第11届国际临床组织相容性会议上Terasaki的总结和1997年Takemoto、Terasaki的进一步完善，结合中国汉族人群5.6万份样本在美国UCLA组织配型中心的HLA分型结果计算机分析，目前比较认同的HLA Ⅰ类、Ⅱ类抗原氨基酸残基配型标准见表 2-10、表 2-11。

2.3　HLA Matchmaker

近年来，越来越多的临床研究表明肾移植术后新生DSA是肾功能晚期失功的独立危险预测因素[11-13]。DSA通过激活补体系统，招募免疫效应细胞等途径对移植物进行攻击，最终导致抗体介导的排斥反应（antibody-mediated rejection，AMR）发生。目前，DSA检测也逐渐成为预测和诊断AMR发生的基石。而在临床肾移植中，供、受者的HLA抗原往往不能完全匹配，受者与供者错配的抗原在肾移植术后的任何时间都有可能产生新生DSA，危及移植肾功能。研究发现，DSA尤其容易在年轻、HLA Ⅱ类位点错配、免疫抑制剂服用不足及依从性较差的受者中发生。如何通过合理的供、受者配型，减少患者术后DSA产生的概率，一直是临床肾移植急需解决的问题。

此前，研究发现DSA的产生是针对有限的供体HLA抗原功能性表位（epitope），基于此原理Rene Duquesnoy创立了HLA Matchmaker软件，通过分析供者所含有的非受者自身epitope个数的多少，预测移植术后DSA产生的概率。这一理论已被多篇临床研究所证实，且独立预测DSA产生概率的准确性明显优于HLA位点错配数与HLA位点氨基酸残基错配数分析。

2.4　PIRCHE

DSA的产生除了与抗原抗体结合的epitope相关外，还涉及B细胞的MHC Ⅱ类分子提呈供者HLA抗原给受者CD4+T细胞和辅助性T（helper T，Th）细胞，以此激活CD4+T细胞与Th细胞，并通过招募一系列效应细胞，最终协助产生抗体分泌型B细胞。基于此原理，PIRCHE公司创立了PIRCHE分析法，预测受者HLA-DRB1分子提呈供者HLA相关肽链的能力。PIRCHE分数越高，代表HLA-DRB1分子提呈供者HLA抗原能力越强。

德国柏林肾内科与肿瘤研究中心对在其中心于1995—2015年20年间对2 787例肾移植受者进行回顾性分析，明确HLA Matchmaker软件与PIRCHE软件在预测DSA产生中的能力。研究人员利用HLA Matchmaker软件将供、受者Epitope的错配数进行分析，并利用PIRCHE软件的PIRCHE分数与新生DSA产生概率进行研究，结果显示：随着Epitope错配数的增加，患者新生DSA产生概率也随之增加；随着PIRCHE分数的增加，患者新生DSA产生概率发生率也随之增加。另外，研究还发现，Epitope错配数或PIRCHE分数的增加与肾移植受者的移植肾存活率存在着明显的负相关关系；HLA-A、B、DR、DQ位点中，PIRCHE分数低的受者的DSA产生概率明显低于PIRCHE分数高的受者。进一步研究发现，在HLA抗原错配不可避免时，通过PIRCHE软件进行分析，选择PIRCHE分数低的供者可以大大降低受者术后DSA的产生概率，且在HLA-DR、DQ位点错配时意义更为重大。

3　群体反应性抗体

群体反应性抗体（panel reaction antibody，PRA）是患者血清中产生的针对HLA的一系列抗体[14-16]。PRA检测方法很多，如CDC、酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immune absorbent assay，ELISA）、流式细胞仪检测法（FLOW-PRA）、LABScreen法等。下面就目前国内使用最多的ELISA法和LABScreen法进行介绍。

3.1　群体反应性抗体检测（ELISA法）

主要使用仪器、耗材、试剂：①仪器包括酶标仪、低温冰箱、计时器、移液器1套；②耗材包括LATM、LAT 板，1.5ml离心管，溶液槽（确保洁净），10μL、200μL、1ml加样枪头若干；③试剂包括对照血清、抗体稀释液、酶交联抗体、酶底物、终止剂。

标本要求：患者血清2ml。

操作方法：见产品说明书。

结果判读与临床意义：见表2-12。

3.2　LABScreen

主要使用仪器、耗材、试剂：①仪器包括Luminex、震荡仪、真空抽滤泵、高速离心机、移液器、计时器；②耗材包括1.5ml离心管，10μL、200μL、1ml加样枪头若干；③试剂包括Lifecodes LifeScreen Deluxe（Ⅰ+ Ⅱ）、荧光二抗。

标本要求：患者血清2ml。

操作方法：详见产品说明书。

结果判读：根据每种微珠的平均荧光强度（mean fluorescence intensity，MFI）值、3个校准值和得分（score）对HLA Ⅰ、Ⅱ类抗体的阴性或阳性进行综合判断。

4　供体特异性抗体

DSA是指受者接受器官或组织移植后体内产生的针对供者组织抗原的特异性抗体，主要包括HLA抗体和非HLA抗体［如抗内皮细胞抗体、抗波形蛋白抗体、抗MHC Ⅰ类相关链A抗原（MHC class Ⅰ chain-related A antigen，MICA）抗体和抗MHC Ⅰ类相关链B抗原（MHC class Ⅰ chain-related B antigen，MICB）抗体等］。目前临床关注的重点主要集中在供者特异性HLA抗体，文献报道中有关DSA大多数都是专指HLA抗体，肾移植术后受者体内DSA动态检测观察分析，为临床早期诊断、合理制定个体化治疗方案以及评估治疗效果提供客观的参考依据，同时也有助于检测机体对治疗的反应，以及制定精准化的个体治疗方案。

4.1　DSA的监测频率

移植前DSA阳性的患者：最佳监测早期AMR时间为1~8周（移植前，移植当日，移植后1、2、4、8周）；移植前DSA阴性的患者：最佳监测AMR的时间为移植后6、12个月，即每半年1次。

4.2　DSA的监测方法——单抗原微珠法

IMMUCOR Lifecodes和ONE LAMBDA两种产品的检测原理均为单抗原微珠法，两者的检测原理、操作步骤大体相同，只是在结果判读时所用到的结果判读分析软件不同，IMMUCOR Lifecodes结果分析采用软件MATCH IT！Antibody，而ONE LAMBDA结果分析采用软件Fusion。值得注意的是，单抗原微珠法是在基因水平检测肾移植受者体内特异性HLA抗体，结合相应供者的HLA基因型，间接判断肾移植受者体内是否存在DSA。

主要使用仪器、耗材、试剂：①仪器：Luminex、高速离心机、振荡器、真空抽虑滤泵、-80℃超低温冰箱、移液器 1 套、计时器；②耗材：1.5ml离心管，10μL、200μL、1ml加样枪头若干；③试剂：Lifecodes LSA CLASS Ⅰ、Lifecodes LSA CLASS Ⅱ，荧光二抗。

标本要求：患者血清2ml。

操作方法：详见产品说明书。

结果判读：IMMUCOR Lifecodes产品在Luminex平台xPONENT软件读取结果，将上机读取的结果导入MATCH IT！Antibody软件，分析结果。ONE LAMBDA 产品读取结果后倒入Fusion软件进行结果分析。MFI值为微珠反应的荧光强度中值，代表了微珠的反应强度；MFI值 <500为阴性（-）；MFI值 500~4 000为阳性（+）；MFI值 4 001~10 000为中度阳性（++）；MFI值>10 000为强阳性（+++）。特异性HLA抗体结果与供者HLA基因型进行比对，即可间接判断受者体内是否存在DSA。

5　受者免疫监测

目前肾移植受者的免疫监测已建立多种实验室技术方法，但均需结合多项指标及临床表现进行综合分析。目前，临床上国内外普遍应用流式细胞术，监测的免疫学指标为淋巴细胞亚群百分比和绝对计数[17-18]。通过双色、三色、四色、六色等多色流式细胞术分析方法，可同时鉴别单个细胞上的多种抗原，而且在极短时间内能够分析大量细胞。目前各种荧光抗体组合部分有配套的试剂盒和分析软件，也可根据临床需要选择相应的抗体进行组合。

淋巴细胞亚群是构成机体免疫系统的主要细胞群体，占外周血白细胞总数的20%~45%，成年人体内约有1012个淋巴细胞，具有显著的异质性，可分为许多表型和功能各异的群体，主要如T细胞、B细胞、自然杀伤（natural killer，NK）细胞等[19-21]。淋巴细胞亚群的数量和功能发生异常，将导致机体免疫异常并产生病理变化，对于几乎终身服用免疫抑制剂的肾移植受者，淋巴细胞亚群的监测极为重要和必要[22-25]。

5.1　监测频率

移植术前，术后1d、3d、7d、14d等时间点，患者药物调整和临床发生异常即时监测。

5.2　四色亚群检测方法

用荧光素标记的CD4、CD8、CD3、CD19、CD16、CD56、CD45单克隆抗体与外周血单个细胞表面相应抗原结合，在激光的激发下，检测结合在细胞表面的荧光参数，可分析T、B、NK细胞在白细胞中的百分比和绝对数。

样本要求：EDTA-K₂抗凝的外周血。

仪器和系统：流式细胞仪及流式分析软件。

实验耗材：绝对计数管（BD Trucount Tubes，免洗）；BD MultiTEST IMK试剂盒；溶血素；去离子水。

操作程序：详见产品说明书。

上机：流式上样管中加入400μL的PBS，混匀，待机检测，获取淋巴细胞5 000个。输入基本信息，设置模板画门，获取淋巴门细胞5 000个，分别圈出T细胞（CD3+）、Th细胞（CD3+CD4+）、杀伤抑制性 T 细胞（CD3+CD8+）、NK 细胞（CD3-CD16+CD56+）、B 细胞（CD19+），并获取相对百分比及绝对数。

5.3　六色亚群检测方法

实验耗材：绝对计数管（BD Trucount Tubes，免洗）；淋巴细胞亚群检测试剂（流式细胞仪法 -6色，6-color TBNK reagent）；溶血素；去离子水。

操作程序：详见产品说明书。

上机：同5.2。

6　质量控制

不管是组织配型技术、HLA抗体的检测还是流式细胞术监测淋巴细胞及其亚群，质量控制是保证结果一致性的重要前提。从标本预处理、标记、染色，到数据采集、存储、分析，到最终出具报告，牵涉很多步骤，每个步骤均存在不稳定因素，质量控制涉及操作的全过程，监督及控制每个操作步骤中的可变因素是确保获得准确、全面的分析结果的必要前提，质量控制包括室内质控和室间质评。

6.1　室内质控

组织配型和免疫检测技术的质量控制包括仪器、试剂、人员3个方面，Luminex和FACSCanto Clinic均严格按照日维护、周维护和月维护程序进行仪器保养，Luminex每月用校准微球进行校准，FACSCanto Clinic每月用BD FACS 7色设置微球进行校准，以保证仪器处于最佳运行状态。技术所用试剂均按说明书进行保存和使用，组织配型和HLA抗体检测的试剂中均含有内控微球及阴阳性质控血清，以及时了解获取的数据是否可信并排除非特异性干扰。操作人员均为医学检验专业持证上岗，PCR操作人员均具有PCR操作上岗证，所有人员均经过培训考核后才进行组织配型和免疫检测技术相关操作。

6.2　室间质评

室间质评是为确定实验室检测能力以及监控持续能力而进行的一种室间比对，是临床实验室全面质量管理的重要内容之一。国家卫生健康委员会临床检验中心已开展PCR-SSO低分辨、中高分辨组织配型和淋巴细胞亚群检测室间质控，每年1次。

（肖　漓　郑　瑾　肖露露）

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刊载于《器官移植》，2019，10（5）：513-520.