【实验方法】

(一)玻片凝集试验

1.取清洁玻片1张,用记号笔分别在玻片上画2个直径为1.5cm左右的圆圈,并在背面分别标记为1号、2号。用滴管在1号圈内滴加生理盐水1滴,在2号圈内滴加大肠埃希菌免疫血清1滴。

2.用灭菌后的接种环取少许大肠埃希菌培养物,分别加入1号、2号圈内,随即将菌液与生理盐水或免疫血清混合成均匀悬浊液。

(二)试管凝集试验

1.取小试管8支,依次编号后,分别排列于试管架上,按表1-1内容进行操作。

2.用微量移液器吸取生理盐水,第1管加入0.9mL,其他管各加入0.5mL。

3.用微量移液器吸取0.1mL大肠埃希菌免疫血清加入第1管中,吹吸3次使之充分混匀,此管血清稀释度为1∶10。从第1管中吸出0.5mL加入第2管中,反复吹吸混匀,然后吸出0.5mL加入第3管中,同法依次稀释至第7管。从第7管吸出0.5mL弃之。第8管不加血清作为阴性对照管。

4.用微量移液器吸取大肠埃希菌菌液,每管加入0.5mL,血清倍比稀释度从第1管开始分别为1∶20、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320、1∶640和1∶1280。

5.将试管内液体振荡混匀后,置37℃恒温箱过夜。

表1-1 试管法凝集试验操作和结果举例(单位:mL)

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