第六节 新拟催眠中药配方的动物实验与临床总结

新酸枣仁汤Ⅰ、Ⅱ号镇静催眠作用、耐受性试验和安全性试验研究

华中科技大学生命科学与技术学院 敖明章 副教授博士（430074）

湖北医药学院退休专家兼某科技公司顾问 姚谦 主任医师（442000）

摘要 目的：研究新酸枣仁汤Ⅰ、Ⅱ号对小鼠自主活动、对小鼠戊巴比妥钠睡眠时间的影响、直接催眠作用、长期使用是否产生耐受性和安全性。方法：健康小鼠，分组给药，观察小鼠自主活动时间、戊巴比妥钠诱导睡眠时间、睡眠潜伏期和睡眠的时间；健康小鼠进行毒性试验和健康大鼠安全性试验。结果：与空白对照组比较，新酸枣仁汤Ⅰ、Ⅱ号组的小鼠自主活动时间缩短、延长戊巴比妥钠诱导睡眠时间、直接催眠试验显示动物的睡眠潜伏期缩短、睡眠时间延长；对数据进行时间-效应分析表明，随着用药时间延长，新酸枣仁汤Ⅰ、Ⅱ号作用趋于明显，新酸枣仁汤Ⅱ号作用优于新酸枣仁汤Ⅰ号，长期使用无耐受性产生；小鼠毒性试验表明一次大剂量服用未见动物死亡和脏器异常改变，大鼠安全性试验表明长期服用新酸枣仁汤Ⅰ、Ⅱ号未见动物死亡，重要脏器解剖检查未见异常。结论：新酸枣仁汤Ⅰ、Ⅱ号对小鼠有明显的镇静催眠作用，长期使用未产生耐受性，且安全无明显毒副作用。

新酸枣仁汤Ⅰ、Ⅱ号是以中医名方酸枣仁汤为基本方，经过科学配伍及现代提取制备技术而形成的两个新的复方，本实验将观察新酸枣仁汤Ⅰ、Ⅱ号对小鼠的镇静催眠作用，以及长期使用是否产生耐受性和安全性评价。

1．材料

（1）动物：健康昆明种小鼠，（20±2）g，雌雄各半，由湖北省实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK（鄂）2003-0005号。

（2）药品：新酸枣仁汤Ⅰ号（主要成分：酸枣仁、百合、丹参、茯苓等，由深圳市神农艾科技有限公司委托海南斯达制药有限公司生产，批号0507116），新酸枣仁汤Ⅱ号（主要成分：酸枣仁、百合、丹参、茯苓、延胡索等，由深圳市神农艾科技有限公司委托海南斯达制药有限公司生产，批号0507118）；地西泮（由西安第四制药厂生产，批号041108）；药品用0.5%CMC-Na配成混悬液，冰箱保存。

（3）仪器与设备：全自动生化分析仪，日立7060全自动血球计数仪，Counter—JTIR；自动送回风大小鼠洁净笼具（IVC），杭州市苏杭实验动物设备厂。

2．方法

（1）对小鼠自主活动的影响：取小鼠60只，雌雄各半，随机分为6组：空白对照组；地西泮组；新酸枣仁汤Ⅰ、Ⅱ号大、小剂量组。灌胃给药量为0.2 ml/10g，每天1次。先于给药前将小鼠于活动箱中适应5min后，记录各组小鼠2min内的活动时间和前肢向上抬举次数作为正常指标，连续5d，于末次给药1h后以同样方法测定2min内各组小鼠活动时间及前肢向上抬举次数。

（2）对小鼠戊巴比妥钠睡眠时间的影响：上述小鼠60只，雌雄各半，随机分为6组，空白对照组；地西泮组；新酸枣仁汤Ⅰ、Ⅱ号大、小剂量组。灌胃给药量为0.2ml/10g，每天1次，连续给药5d，于末次给药后1h后，各小鼠戊巴比妥钠40mg/kg；以小鼠翻正反射消失为入睡时间，而从翻正反射消失至恢复时间为睡眠时间，记录各组小鼠的睡眠时间。

（3）对小鼠的直接催眠作用及长期使用是否产生耐受性：取健康小鼠72只，均衡随机分为6组，每组12只，雌雄各半；空白对照组；地西泮组；新酸枣仁汤Ⅰ、Ⅱ号大、小剂量组。灌胃给药量为0.2 ml/10g，每天1次，连续14d，空白对照组灌同等量的CMC-Na混悬液，小鼠翻正反射消失超过30s视为进入睡眠。睡眠潜伏期为给药后至动物进入睡眠的时间，睡眠时间以入睡后至动物翻正反射恢复的时间计。于d1, d5, d10和d14的相同时间段进行测试，记录各组动物的入睡及睡眠情况。

（4）急性毒性试验：健康小鼠40只，均衡随机分为2组，每组20只，雌雄各半。禁食16h，不禁水。以新酸枣仁汤Ⅰ、Ⅱ号内容物的最大混悬度（0.4kg/L），最大给药量（0.8 ml/20g）给予小鼠一次口服灌胃，剂量为16g/kg。观察给药后小鼠中毒症状，并连续7d观察进食、行为活动及体重增长情况。

（5）安全性试验。① 动物及饲养条件：试验用Wistar系SPF大鼠，雌雄各半，（200±10）g。预饲1周后雌雄大鼠随机分为5组，每组12只，空白对照组；新酸枣仁汤Ⅰ、Ⅱ号大、小剂量组。饲料为大鼠精饲料，由湖北省实验动物中心提供，用饮水瓶自由摄取经过滤器过滤的自来水。饲养室温度为（23 ± 1.5）℃，湿度为（55±15）%，自动照明。② 受试样品及给予方法：新酸枣仁汤Ⅰ、Ⅱ号大、小剂量分别为6g/kg和2g/kg，以0.5%CMCNa配成混悬液，按2ml/100g体重灌胃给药，每天1次，连续4周，对照组灌同等量的0.5% CMCNa混悬液。③ 检测及观察项目：每周测量体重2次，测定进食及饮水量，并观察一般状况。4周后处死，解剖，摘取脑、胸腺、肺、心、肝、脾、肾上腺、睾丸、子宫及卵巢称湿重，计算脏器指数。另外，取消化道、胸骨、肠系膜淋巴结等与前述脏器一起按常规制作切片标本，用光学显微镜进行病理组织学检查。血液生化检查，测定总胆固醇、碱性磷酸酶、AST、ALT、总蛋白、白蛋白、尿素氮、肌酐、血糖，并进行红细胞、血红蛋白和白细胞计数。

3．统计与分析

采用SPSS10.0进行统计处理。

4．结果

（1）新酸枣仁汤Ⅰ、Ⅱ号对小鼠自主活动的影响结果：空白对照组小鼠行为活动无明显变化，新酸枣仁汤Ⅰ、Ⅱ号小鼠自发活动较生理盐水组明显减少，结果见表3-1。

（2）新酸枣仁汤Ⅰ、Ⅱ号对小鼠戊巴比妥钠睡眠时间的影响的结果：结果表明新酸枣仁汤Ⅰ、Ⅱ号组小鼠睡眠时间较生理盐水组明显延长，结果见表3-2。

（3）对小鼠的直接催眠作用及长期使用是否产生耐受性结果：与空白对照组比较，新酸枣仁汤Ⅰ、Ⅱ号组动物的睡眠潜伏期缩短、睡眠时间延长（P＜0.01），效果尤以新酸枣仁汤Ⅱ号为佳。提示新酸枣仁汤Ⅰ、Ⅱ号对小鼠有直接催眠作用。其时间-效应分析表明，随用药时间延长，它的催眠作用趋于明显，并未表现出耐受现象。睡眠潜伏期结果见表3-3，睡眠时间结果见表3-4。

（4）急性毒性试验结果：小鼠一次口服灌胃最大混悬度、最大给药体积的新酸枣仁汤Ⅰ、Ⅱ号内容物的混悬液，剂量为16g/kg，动物未出现死亡，仅在给药当天动物活动下降，进食量减少，第二天即恢复正常。毛发、一般行为活动、呼吸、心率等未见异常，经7d内观察，小鼠行为活动、进食饮水及体重增长等情况正常。

（5）安全性试验结果：连续给药4周，给药组在给药后困倦、嗜睡、活动减少等现象，但每日进食量及饮水量与对照组比较未见显著差异。试验开始时雌雄大鼠各组的体重约为200g,4周后雄鼠组体重为233～246g，雌鼠组为225～240g，均正常增加至成年大鼠的重量，结果见表3-5；血常规和血液生化学检查未见明显异常，药物组与对照组间无差异，结果见表3-6和表3-7；器官重量和脏器指数检测，与对照组比较未见明显差异；结果见表3-8。动物解剖时重要脏器未见明显的肉眼病变，病理组织学检查给药组各脏器（脑、心、肝、脾、肺、胃、肾、肾上腺、胸腺、睾丸、子宫及卵巢、淋巴结）未见明显异常，分别见书后图3-1～图3-12。上述结果表明，新酸枣仁汤Ⅰ、Ⅱ号长期服用安全，对健康造成严重影响的可能性很低。

5．讨论

失眠是临床常见而又难治的病症，目前西药的治疗主要应用苯二氮一类等镇静催眠药物，在治疗的同时也产生一定的依赖性与耐药性。而中医药治疗失眠具有较好的疗效和安全性，且无西药的副作用。本文主要药效学实验表明，新酸枣仁汤Ⅰ、Ⅱ号可明显抑制大小鼠的自主活动；延长阈剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间；小鼠的直接催眠试验表明新酸枣仁汤Ⅰ、Ⅱ号具有催眠效果，并且呈现了一定的量效关系，新酸枣仁汤Ⅱ号的疗效比新酸枣仁汤Ⅰ号要好；而且新酸枣仁汤Ⅰ、Ⅱ号长时间使用未见耐药性产生。本次急性毒性试验小鼠最大灌胃给药量为16g/kg，相当于临床剂量的105倍（临床用量为每日1次，每次3粒，每粒0.5g），小鼠均未出现死亡。结果证实新酸枣仁汤Ⅰ、Ⅱ号口服给药是安全可靠的。安全性试验结果表明：长时间服用新酸枣仁汤Ⅰ、Ⅱ号（大小剂量分别为6g/kg和2g/kg，相当于临床剂量的40倍和15倍）未引起动物组织脏器的损伤，因此，长期服用是安全的，对健康造成严重影响的可能性很低。

安神助眠汤及颗粒冲剂治疗失眠症210例疗效对比分析

姚谦（湖北医药学院退休主任医师）

关键词 失眠症，安神助眠，中药研究。

摘要 本文作者在多年医疗实践中选择古代中医药著名方剂，结合现代中药研究成果，精选确有安神催眠或助眠作用的中药，组成安神助眠汤，并制成颗粒冲剂，分组应用于临床共210例，并与对照组进行对比观察，分析其各组疗效。经追踪观察证明安神助眠汤与颗粒冲剂对失眠症的治疗效果均达到96%以上，显著优于对照组。初步结论：新拟中药配方安神助眠汤及颗粒冲剂，对失眠症有确切疗效，并且具有无成瘾性、无依赖性、见效快、稳定时间长等优点。

前言 失眠症是指持续较久的睡眠障碍。它大多是由心理、社会因素引起，或某些个体因素、习惯因素、环境因素以及躯体疾病因素引起持久的入睡困难、早醒、睡眠表浅、易醒、多梦为主要临床表现。偶尔失眠不属失眠症，无须治疗。但长期失眠、频繁失眠，给人体精神与机体造成过度疲劳与损害所形成的恶性循环是十分有害的。长期以来，各种古老的西医药或现代的催眠药与安定类药，是失眠病人的救命药。但其仅有临时对症治疗作用而无彻底治愈的短效性，使病人不得不长期服用，从而造成的依赖性和成瘾性，以及化学药品长期使用的毒副作用，对病人弊多利少。国家已列入处方药并有取药数量的限制。因而在天然植物中草药中探求高效而又无依赖性、成瘾性，且属低毒、无毒、少副作用制剂成为迫切需要，本文就此进行科研与临床探索。

一、一般资料

1．资料来源

仅就2002年至2003年在某院门诊对以失眠为主诉症状就医，应用安神助眠汤为主治方剂，并有复诊，可追踪结果达半年至1年以上的病员，随机选择，进行总结分析。其诊断标准依据世界卫生组织对精神与行为障碍分类非器质性失眠症的诊断标准。

2．资料一般情况分析

见表3-9。

二、治疗方法

（1）安神助眠汤组：以酸枣仁、茯神、百合、元胡、甘草为主，组成配方，煎成汤剂，每日1剂，连服12剂或18剂，观察半年。

（2）安神助眠颗料冲剂：配方与安神助眠汤相同，制成颗料冲剂，每袋10g（含浓缩干浸膏粉4g），于睡前半小时或临睡前服1袋，连续服6次（1次/d）或12次。追踪观察半年。

（3）对照组：以安定10mg每晚睡前1次，连服10d，观察即时效果及追踪半年。

三、疗效判断标准

仅根据临床要求制定。

（1）有效：连续用药5～10d后，消除难入眠，每次睡眠可达6h，但停药1周即有复发，再服仍有效，但不能达到1个月以上的巩固。

（2）显效：服药1～5d即解除难入睡，每次睡眠可达7h以上，服药12d，停药后仍可巩固半月或1个月，但仍易复发。

（3）基本治愈：服药12～18d，不再失眠，睡眠每晚可达7～8h，停药半年至1年后仍未复发。

（4）无效：服药连续10d仅有轻度改善，每晚仅睡3～4h，且多梦，睡后不解除疲乏或服药后仍长达2h不能入睡。

四、治疗结果

分组疗效与分析：见附表3-10。

（1）安神助眠汤组与安神助眠颗粒冲剂组总有效率P≥0.05，无显著区别，两组疗效接近。

（2）安神助眠汤组与安定组总有效率P≤0.01，差别显著。

（3）安神助眠颗粒冲剂组与安定组总有效比P≤0.01，差别显著。

讨论

（1）安神助眠汤是依据中国传统医学汉代著名医学家张仲景所著《金匮要略》书中治疗虚烦不眠的“酸枣仁汤”和治百合病的“百合知母汤”合并配方，又根据现代中药药理研究，多家对酸枣仁动物试验，结合本人所做动物实验，均证实“酸枣仁有良好的镇静催眠作用、安定作用、抗惊厥作用”。临床应用亦验证酸枣仁无论单用或复方配伍，都能达到“养肝、宁心、安神、催眠、益阴、止汗”之功效，“对于心、脾气虚的神经衰弱，健忘、多梦、易醒、饮食减少、疲倦无力有良好的治疗效果”，故作为配方之主药。实验也证明“茯神的水煎剂可对抗咖啡因所致小鼠过度兴奋”，临床应用单味茯苓或茯神煎剂口服，“可治疗慢性精神分裂症”，故选其作为配方之辅药；更选择经动物实验证明其催眠率达90%并兼有抗疲劳作用的中药百合作为第二辅药，其与酸枣仁、茯神合用于治疗失眠、健忘、多梦有更显著的疗效。在临床实践中经常遇到失眠病员多数有入睡困难，常常思虑起伏不断，如果助眠或催眠药物不能以较快的速度抑制中枢神经，则过多的思维冲动会激起醒觉的恶性循环，即使加大剂量也难以助眠入睡，因此，又选择经动物实验证明可在半小时内透过血脑屏障而对中枢神经起到快速镇静催眠，并可造成深睡脑电慢波出现的元胡，合甘草作为佐使。因此精选诸中药组方合用，既保证了安神助眠的确切作用，又可在短时间内达到快睡并能进入深睡，且可持续较长睡眠时间的优良效果。“安神助眠汤”经本作者180例临床治疗实践，证明总有效率达到98.3%，而显效率亦达到88.3%，显著优于安定对照组。说明“安神助眠汤”确是高效助眠剂。

（2）安神助眠颗粒冲剂的药物配方与组成比例与安神助眠汤剂基本相同，经30例自愿者试用，初步证明其总疗效达到96.7%，接近汤剂的疗效，其显效率亦达73.3%，稍逊于汤剂。若改进工艺流程，采取更先进工艺制作，减少有效成分在制药过程中的耗损，则可进一步提高显效率。

（3）在治疗以失眠为主症又兼有心烦、多梦、睡中呓语、烦躁易怒、疲乏无力、精神不振和食欲减退等症状的病员，在服用安神助眠汤或颗粒冲剂得到良好睡眠后，这些症状均随之消失或明显改善。

（4）在临床应用共210例的病员中，均未发现有任何毒副作用。这与所组成药物本身毒副作用低有关，并和掌握有效而又适当的用量有关，也和在复方配伍中各药的相互协同又相互制约、主辅佐使得当分不开。临床应用时把握好适当用量，不可过量，也十分重要。汤剂在使用时，宜适当辨证加减。

（5）本文的目的是通过历史名方的研究与提炼，结合现代科研成果，研制更有效新配方，进而以现代科技提炼制作便于临床应用的新剂型，制成纯天然植物安神助眠药，以达到既有高效性又无依赖性、成瘾性的助眠或催眠效果。并且不仅仅是失眠症状的一时改善，而是着眼于调整脑中枢恢复正常睡眠机能，争取更多的治愈。本文治疗结果说明，有相当一部分病例（汤剂47.2%）达到基本治愈。进一步提高治愈率，更是努力的方向。也是为了打破以前中药制剂无速效、高效安神催眠药的局面。